DNA پلیمراز: عملکرد PCR اغلب به DNA پلیمراز مقاوم در برابر حرارت مرتبط است، بنابراین انتخاب آنزیم مناسب بسیار مهم است که نه تنها بازده بالایی در تمام طول واکنش ارائه کند بلکه در دماهای بالا نیز فعالیت خوبی داشته باشد.
آنزیم:Reverse transcriptase آنزیمهایی هستند که قادر به سنتز DNA از روی RNA می باشند. این آنزیمها عموماً منشأ ویروسی (رتروویروس) دارند.
dNTPs: دزوکسی نوکلئوتیدهای سه فسفاته نقش مهمی در واکنش دارند، در واقع dNTPs بلوکهای ساختاری هستند که DNA پلیمراز با کمک و همراهی آنها ، رشتههای جدید را ایجاد می کند.
غلظت منیزیم: در واکنش qRT-PCR، کلرید منیزیم یا منیزیم سولفات معمولاً در غلظت نهایی 3 میلی مولار استفاده می شود. این غلظت برای اکثر اهداف به خوبی کار می کند.